细胞培养生物反应器的操作方法
点击次数：153 更新时间：2025-09-25
一、上罐前的准备
1、细胞悬液制备：将预培养的细胞从摇瓶或培养皿中收集，混匀后取1mL进行细胞计数，确保接种密度适宜。
2、设备灭菌：检查反应器罐体、管道及电极是否已灭菌(如121℃高压蒸汽处理)，避免微生物污染。
3、培养基与缓冲液：准备足量培养基，并预调pH至目标范围(如7.2-7.4)，灭菌后冷却备用。
二、接种与初始培养
1、无菌操作：在生物安全柜中，将细胞悬液通过无菌管道转移至反应器内，同时通入压缩空气辅助混合。
2、参数设置：
温度：哺乳动物细胞通常设为37℃。
溶氧(DO)：初始设为40%，通过气体混合(O₂/N₂/CO₂)维持稳定。
pH控制：使用蠕动泵补加酸/碱或通入CO₂调节，保持pH在6.5-7.0(视细胞类型调整)。
三、培养过程监控
1、定期取样：每24小时在线取样，检测细胞密度、pH及代谢物(如葡萄糖、乳酸)浓度。
2、流加补料：根据营养消耗情况，流加浓缩培养基或特定成分(如氨基酸)，延长细胞对数生长期。
3、剪切力控制：采用低转速搅拌(如50-100 rpm)或波浪式反应器，避免机械损伤。
四、收获与清洗
1、终止培养：当细胞进入衰亡期或产物积累达峰值时，关闭自动控制系统。
2、排液与收集：通过压缩空气将培养液排入废液桶，分离细胞与上清液。
3、清洗灭菌：用纯化水冲洗罐体及组件，0.1M氢氧化钠浸泡过夜，确保无残留。
五、注意事项
1、无菌操作：全程需严格避免污染，操作前消毒手套及工具。
2、参数校准：定期校验pH、溶氧电极，确保数据准确。
3、放大生产：分批式操作可直接放大至工业规模(如12000L)，但需优化搅拌与传质效率。
通过以上步骤，可高效完成细胞培养生物反应器的操作，适用于单克隆抗体、疫苗等生物制品的生产。
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